Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的步骤中逐渐扩展

从第一次经常出现肝细胞自身免疫反理应到经常出现1改进型哮喘诊断腹泻的成效叛将在婴幼儿时期就有更好的刻画，多个肝细胞自身免疫反理应白血病的婴幼儿里有70%在血清类比后10年内患病哮喘，而随访15年的婴幼儿这一分之一增大到84%。来得之下，占多数诊断1改进型哮喘一半以上的改进型1改进型哮喘的复发机制还不能得不到充分的科学研究。

越发多的人开始用到分期系统来假定1改进型哮喘的成效：母体在经常出现多种肝细胞自身免疫反理应时进到第1阶段性，经常出现浓度诱发时进到第2阶段性，经常出现腹泻时进到第3阶段性。一些多发肝细胞自身免疫反理应白血病的母体，在1期和2期，成效速度太快，并发展为复发的1改进型哮喘。我们在此之后刻画了一分组在首次检查到多种肝细胞自身免疫反理应抽取后至再加10年无哮喘的极太快成效者，这分组病变人口数再加，但构造非常说明。随后，我们发现肝细胞自身免疫免疫CD8+T巨噬细胞反理应在成效加速的病变里原则上不发挥作用，但在近期复发和长期发挥作用的哮喘病变里很更易检查到。这也许证明，与成效病变来得，这些病变自身免疫反理应的闭环增强。

早期科学研究证明，尽管闭环性T巨噬细胞(Treg)数量经常性，但哮喘病变发挥作用一些功能缺陷，其里有数对IL-2的反理应能力减缓。此外，哮喘病变里的现象CD4+T巨噬细胞也许对闭环极富抵抗性，乏善可陈为现象T巨噬细胞的依赖性减弱，纯净产生的Treg和肾脏产生的其会Treg，以及免疫经历的CD4+T巨噬细胞里IL-2反理应减弱。本科学研究的目的是刻画了CD4+闭环性T巨噬细胞(Treg)在领头极加速成效者里的构造，他们的为数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群结合的平行科学研究，在21岁以下确诊的病变亲属里检查1改进型哮喘的脆弱状况。我们在此之后刻画了长期加速成效者的构造，他们保持多重肝细胞自身免疫反理应白血病超过10年，但不能经常出现哮喘的诊断腹泻，太快性或非来癫痫自身免疫。随后，10名继续保持无哮喘并希望提供大量尿液抽取的加速成效者设为T和B巨噬细胞功能了解科学研究。在目前的科学研究里，8名太快成效者(SP分组)，里位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身免疫反理应白血病。所有的参与者都位处1改进型哮喘成效的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身免疫反理应对某些免疫的白血病反理应，然而，一名病变仍然位处2期至再加6年，但不能经常出现诊断腹泻，一名病变被诊断为哮喘，该受试者72岁，在采集实验室抽取时，其HbA1c上升到53 mmol/mol(7%)，在数据了解科学研究里对该遗传物质来进行了除此以外分析报告。分离出来外周血单个反应器巨噬细胞(PBMCs)，采用多表达式流式巨噬细胞绝技和T巨噬细胞依赖性试验分析报告遗传物质里Treg的频谱、表改进型和功能。用到FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、总括和复出)来进行无全权负责聚类了解科学研究，分析报告Treg表改进型。

结果：与肥胖遗传物质来得，来自太快成效体的梦境CD4+T巨噬细胞的全权负责聚类结果显示，激光阴的梦境CD4+ Treg频谱增大，与止痛药其会的TNFR相关酶(GITR)理解增大有关。一名HbA1c上升的病变与成效加速者和匹配的折衷分组来得，Treg谱有所各有不同。功能了解科学研究证明，与肥胖遗传物质来得，来自加速成效体的Treg介导的CD4+现象T巨噬细胞依赖性明显受损。乏善可陈为对现象CD4+T巨噬细胞CD25和CD134理解的依赖性增大。

三幅1 了解的表改进型了解科学研究结果显示，CD4+Treg亚改进型在太快成效配置文件里增大。由FlowSOM填充的Treg房，聚集在来自所有遗传物质的光阴CD4+CD45RA -巨噬细胞上。根据标识物理解鉴定出10个元簇:梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;存储器Treg_1;存储器Treg_2;存储器Treg_3;和存储器Treg_4。(a)用到9个各有不同Treg标识填充的10个元簇的MST。每个键值均是由一个一个大(100个一个大)，更多的元一个大(10个元一个大)在键值分组周围着色。每个键值里的饼三幅问到单个标识的理解级别。(b)每个元聚类的热三幅，以结果显示整体标识理解。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)填充三幅，以及FlowSOM辨识的每个元簇的表层。(e-l)比起丰度为每个metacluster木箱等分(丰度> 0.05%)确认为HD和SP分组:存储器Treg_2 (e),存储器Treg_3 (f),存储器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T巨噬细胞(l)。紫色红色均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon相加表示法秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 用到CITRUS的预测模改进型证明，Treg频谱的增大是成效加速的徽标。PG依赖型(a - f)和柑橘了解科学研究(g-k)比较SP参与者和匹配的HD参与者在CD4+CD45RA−T巨噬细胞上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l社会阶层的权威性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR理解来进行分离出来，模拟FlowSOM社会阶层。(b) HD(白点)和SP(白点)分组以及遗传物质SP 606(紫色)里CD25+ cd127的频谱汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依赖型子集的木箱等分;(c) HLA-DRloGITR−(存储器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(存储器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(存储器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+存储器T cell)。(g - i)柑桔簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3理解强度着色，红色引人注意的簇被辨识为SP和HD配置文件之间的各有不同。(j)木箱等分结果显示了在SP(白点)和HD(灰点)分组里，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的比起丰度(分之一)。(k)直方三幅结果显示每个簇的表改进型(粉红色)和Treg标识比起理解与时代背景理解(紫色);上列，存储器Treg_3;比如说即刻，存储器Treg_4。时代背景与所有其他簇里标识的理解有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon相加表示法秩检验

三幅3 与肥胖献血者来得，成效加速者梦境treg的GITR增大。每个梦境CD4+T巨噬细胞元簇(梦境T巨噬细胞_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T巨噬细胞;HLA-DR + GITR +梦境T巨噬细胞;存储器Treg_2;存储器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个理解标识的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)配置文件的理解热三幅(sp606不有数在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇里所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)的FlowSOM GITR理解串联，结果显示直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon相加表示法秩和检验，p< 0.07(紫色)所有遗传物质有数，p< 0.05(紫色)遗传物质SP 606和匹配的HD不有数在测试里。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里GITR理解，从PG依赖型，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(紫色)串联，结果显示直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon相加表示法秩检验

三幅4 来自加速成效的CD4+ treg巨噬细胞操控现象CD4+T巨噬细胞的能力减缓。SP分组用紫色的该线和红色问到，HD分组用黑色的该线和红色问到，紫色的该线/红色问到遗传物质sp606。用到CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞来进行分选。CD4+CD25−(理这样的话者)被标识为CFSE, Treg按检视的分之一硫酸铜。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，人才3几天后来进行流式巨噬细胞绝技检查。(a-d)与CD4+理这样的话者比起理应的treg人才(内皮)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD理这样的话者人才。(a,b,f) CFSE转化(a,e)和CFSE依赖性平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的依赖性平均值。用到白血病折衷(激光阴的响理应巨噬细胞不含treg)计算依赖性平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差了解科学研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 现象CD4+T巨噬细胞对加速成效的T巨噬细胞再生的依赖性更敏感性。SP分组用紫色的该线和红色问到，HD分组用黑色的该线和红色问到，紫色的该线/红色问到遗传物质sp606。用到CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T巨噬细胞来进行分选。CD4+CD25−(理这样的话者)被cfsel标识，treg按检视的分之一硫酸铜。用抗CD3 /28微珠再生巨噬细胞，人才3几天后来进行流式巨噬细胞绝技(CD25反染)和巨噬细胞因子了解科学研究。HD Treg与HD、SP或sp606理这样的话者共同人才。(a,b) CFSE转化(a)和CFSE依赖性三份(b)。(c,d) CD25依赖性三份(c)和CD134依赖性三份(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才里的理解。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差了解科学研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论证：我们断定的论证是，来自加速成效子的再生梦境CD4+Treg在GITR理解里得不到了扩展和非常丰富，强调了实质性科学研究Treg在1改进型哮喘后果母体里的异质性的合理性。

原文记事：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28